烟实夜蛾信息素结合蛋白3 cDNA的克隆、序列分析与原核表达

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篇1：烟实夜蛾信息素结合蛋白3 cDNA的克隆、序列分析与原核表达

烟实夜蛾信息素结合蛋白3 cDNA的克隆、序列分析与原核表达

利用RT-PCR技术从烟实夜蛾Helicoverpa assulta(Hass)雄虫触角中扩增得到了信息素结合蛋白3(Hass PBP3).克隆和测序结果表明,该基因核苷酸序列全长495bp,编码164个氨基酸残基,预测分子量18.5kD.并预测N-末端疏水区包含由22个氨基酸组成的信号肽.因此,成熟蛋白应包括142个氨基酸,预测分子量为16.1 kD,等电点为5.44.经氨基酸序列同源性分析发现,此序列与已知昆虫PBP3有较高的同源性,而且具有气味结合蛋白的典型特征.将该基因重组到表达载体pGEX-4T-2中进行原核表达.经IPTG诱导、SDS-PAGE分析和Western印迹检测,结果表明烟实夜蛾PBP3基因能在大肠杆菌BL21中表达,电泳检测到一条大约42kD的.外源蛋白,与预测的融合蛋白分子量相符.

作 者：刘晓光 安世恒 罗梅浩 郭线茹 原国辉 LIU Xiao-Guang AN Shi-Heng LUO Mei-Hao GUO Xian-Ru YUAN Guo-Hui  作者单位：河南农业大学植物保护学院,郑州,450002 刊 名：昆虫学报  ISTIC PKU英文刊名：ACTA ENTOMOLOGICA SINICA 年，卷(期)： 49(5) 分类号：Q966 关键词：烟实夜蛾   信息素结合蛋白   基因克隆   原核表达  

篇2：烟实夜蛾触角化学感受蛋白cDNA的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达

烟实夜蛾触角化学感受蛋白cDNA的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达

利用RT-PCR技术扩增了编码烟实夜蛾Helicoverpa assulta触角化学感受蛋白(chemosensory protein)的全长cDNA.克隆和测序结果表明,烟实夜蛾化学感受蛋白基因核苷酸序列全长384bp(GenBank序列号:DQ285667),编码127个氨基酸残基,预测N-末端包含16个氨基酸组成的信号肽序列,因此估测其成熟蛋白分子量为12.97kD,等电点为5.32.将该基因重组到表达载体pGEX-4T2中,并转入原核细胞中进行表达.SDS-PAGE和Westem印迹分析表明,经IPTG诱导后,烟实夜蛾化学感受蛋白基因能在大肠杆菌BL21中表达,电泳检测到一条约39 kD的外源蛋白,与预测的`融合蛋白分子量大小相符.

作 者：蒋金炜 高素霞 安世恒 王琛柱 JIANG Jin-Wei GAO Su-Xia AN Shi-Heng WANG Chen-Zhu  作者单位：蒋金炜,高素霞,安世恒,JIANG Jin-Wei,GAO Su-Xia,AN Shi-Heng(河南农业大学植物保护学院,郑州,450002)

王琛柱,WANG Chen-Zhu(中国科学院动物研究所,农业虫害鼠害综合治理研究国家重点实验室,北京,100080)

刊 名：昆虫学报  ISTIC PKU英文刊名：ACTA ENTOMOLOGICA SINICA 年，卷(期)：2006 49(5) 分类号：Q966 关键词：烟实夜蛾   化学感受蛋白   基因克隆   测序   原核表达  

篇3：人朊蛋白基因的克隆与原核表达

人朊蛋白基因的克隆与原核表达

以人血液中提取的总DNA为模板,克隆朊蛋白(prion protein, PrP)基因Prnp的.开放阅读框(ORF),与pMD-18T载体连接后转入E.coli JM109,用Blast软件比较重组质粒序列,结果表明获得的人Prnp的ORF与Genbank登录的相应核苷酸序列最高同源性为99.6 %,推导的氨基酸序列同源性为99.8 %.将编码人成熟PrP的基因定向克隆到pET-30a(+)表达载体,将重组质粒pET-homPrP转化E.coli BL21(DE3),在37 ℃下用1.0 mmol/L IPTG诱导,重组融合蛋白获得高效表达,SDS-PAGE显示表达产物以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的20 %～25 %.用Ni-NTA树脂亲和层析纯化了表达产物.Western-blotting分析表明,融合蛋白被抗PrP的单克隆抗体特异识别.因此,在大肠杆菌中表达的人成熟PrP融合蛋白可以作为制备PrP抗体的免疫原.

作 者：姜海霞 刘永生 杨孝朴 陈豪泰 朱小玲 张杰 谢庆阁 JIANG Hai-xia LIU Yong-sheng YANG Xiao-pu CHEN Hao-tai ZHU Xiao-ling ZHANG Jie XIE Qing-ge  作者单位：姜海霞,朱小玲,JIANG Hai-xia,ZHU Xiao-ling(甘肃农业大学动物医学院,甘肃,兰州,730070;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部畜禽病毒学重点开放实验室,甘肃,兰州,730046)

刘永生,陈豪泰,张杰,谢庆阁,LIU Yong-sheng,CHEN Hao-tai,ZHANG Jie,XIE Qing-ge(中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部畜禽病毒学重点开放实验室,甘肃,兰州,730046)

杨孝朴,YANG Xiao-pu(甘肃农业大学动物医学院,甘肃,兰州,730070)

刊 名：甘肃农业大学学报  ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 41(3) 分类号：Q785 Q786 关键词：人   朊蛋白基因   克隆   原核表达  

篇4：人源胸腺素α原和白介素2融合蛋白的基因克隆与原核表达

人源胸腺素α原和白介素2融合蛋白的基因克隆与原核表达

目的 克隆人胸腺素α原/白介素2 融合基因,构建其原核表达载体并在大肠杆菌系统中有效表达.方法 采用RT-PCR方法,从人白血病细胞和人T淋巴细胞中分别扩增得到胸腺素α原/白介素2 基因,利用基因重组技术将融合基因片段重组于pET42a原核表达载体上,构建成pET42a-PI.经酶切、测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,IPTG诱导蛋白表达.表达产物经离子交换和分子筛纯化后进行Western blot分析,通过人外周血单核细胞玫瑰花结实验对融合蛋白进行了初步的活性测定.结果 凝胶电泳显示PCR产物的长度约750 bp,测序结果表明,扩增片段与预期序列一致.重组菌在IPTG诱导下表达相对分子质量为28 kDa的'蛋白,纯化后的融合蛋白能提高人外周血单核细胞玫瑰花结形成率,表明具有一定活性.结论 成功克隆和构建了人胸腺素α原/白介素2融合基因的原核表达载体,并在原核表达系统中得到有效表达.

作 者：黄明 韦剑 周飞燕 HUANG Ming WEI Jian ZHOU Fei-yan  作者单位：广州拜迪生物医药有限公司,广东,广州,511495 刊 名：广东药学院学报  ISTIC英文刊名：JOURNAL OF GUANGDONG COLLEGE OF PHARMACY 年，卷(期)： 24(3) 分类号：Q786 关键词：胸腺素α原   白介素2   融合蛋白   表达  

篇5：绵羊重组朊蛋白的原核表达与结构分析

绵羊重组朊蛋白的原核表达与结构分析

利用DNA重组技术,将绵羊朊病毒正常成熟蛋白基因OvPrPc插入表达载体pET30a,在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,获得的表达产物为绵羊朊蛋白OvPrP(23～256).经SDS-PAGE分析,表达产物以包涵体形式存在.将包涵体蛋白用8 mol/L尿素溶解,在变性条件下经Ni-NTA柱亲和层析纯化,而镍柱能竞争性结合含有6×His标签的pET30a表达的.目的蛋白.由于目的蛋白是在变性条件下纯化的,需要将其复性后才能恢复天然构象.采用梯度尿素透析复性后,复性率为25%左右.为了进行重组朊蛋白的结构分析,将重组蛋白进行超滤浓缩,至蛋白浓度为0.4 mg/mL时,采用远紫外线圆二色谱(CD)分析其二级结构,并对其高级结构进行了预测.结果表明:通过Western-blotting鉴定,表达的绵羊朊病毒正常成熟蛋白OvPrP(23～256)的分子量为25172.80 u左右.经过Jascow32软件分析后,测得OvPrP(23～256)的二级结构含量为:α螺旋为39.4%,β折叠为0%,转角为0%,无规卷曲为60.6%.绵羊重组朊蛋白高级结构的分析为朊病毒疾病的发生机理的探讨提供科学依据.

作 者：刘美丽 赵德明 周向梅 尹小敏 LIU Mei-li ZHAO De-ming ZHOU Xiang-mei YIN Xiao-min  作者单位：中国农业大学,国家动物海绵状脑病实验室,北京,100094 刊 名：中国预防兽医学报  ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE 年，卷(期)： 28(6) 分类号：Q78 关键词：绵羊朊病毒蛋白   原核表达   圆二色谱   结构分析  

篇6：人趋化因子巨噬细胞炎性蛋白3α的克隆与原核表达

人趋化因子巨噬细胞炎性蛋白3α的克隆与原核表达

目的克隆人趋化因子MIP-3 alpha基因,表达并初步纯化MIP-3 alpha融合蛋白.方法从人扁桃体中提取总RNA,再进行RT-PCR,扩增MIP-3 alpha成熟蛋白基因,并在5'和3'端分别添加NcoI和EcoRI酶切位点,通过与之对应的存在于pET32a(+)质粒上的酶切位点重组于pET32a(+)载体上,转化E.coli BL21trxB(DE3),筛选阳性克隆,酶切鉴定,DNA测序检测插入序列的正确性,缺失突变MIP-3 alpha序列前端多余碱基,获得MIP-3 alpha天然蛋白表达载体pET32a(+)/MIP-3 alpha,SDS-PAGE分析其表达,Westem Blot验证融合蛋白.大量表达并初步纯化MIP-3 alpha融合蛋白.结果成功克隆了MIP-3 alpha基因,表达并初步纯化得到MIP-3alpha融合蛋白.结论在大肠杆菌中成功构建的.MIP-3 alpha硫氧还蛋白融合表达载体,以可溶性蛋白的方式表达MIP-3 alpha硫氧还蛋白.

作 者：顾涛 罗福康 沈大斌 龚小云 郑红  作者单位：第三军医大学西南医院综合实验研究中心,重庆400038 刊 名：重庆医学  ISTIC PKU英文刊名：CHONGQING MEDICINE 年，卷(期)：2006 35(4) 分类号：Q785 关键词：MIP-3 alpha   融合表达   pET32a(+)质粒   蛋白纯化  

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